การเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย: วิธีการ หลักการ ขั้นตอนและเงื่อนไข

2024 ผู้เขียน: Angel Austin | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-17 05:43

จุลินทรีย์ในธรรมชาติรอบตัวเรามีอยู่ทั่วไปในดิน แหล่งน้ำ บนพื้นผิวของสิ่งของต่างๆ ผู้คนและสัตว์อาศัยอยู่โดยพวกมัน ทั้งหมดนี้สามารถใช้เป็นแหล่งที่มาของการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ในอาหาร ยา และสายการผลิต การเพาะเลี้ยงแบคทีเรียมีความจำเป็นต่อการศึกษาคุณสมบัติ ความต้องการ และลักษณะเฉพาะของแบคทีเรีย ในทางกลับกัน นี่ก็เป็นขั้นตอนสำคัญในการพัฒนายาหลายชนิด การวินิจฉัยโรคในห้องปฏิบัติการ การคำนวณเครื่องปฏิกรณ์การผลิต และอื่นๆ อีกมากมาย

แนวคิดทั่วไป

การเพาะเลี้ยงแบคทีเรียในทางจุลชีววิทยาหมายถึงการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ในห้องปฏิบัติการ ในทางกลับกัน จุลินทรีย์ที่เติบโตบนอาหารที่เลือกไว้จะเรียกว่าวัฒนธรรม วัฒนธรรมสามารถผสมกันได้หากเกิดจากจุลินทรีย์ประเภทต่างๆ และจะทำให้บริสุทธิ์ได้หากมีแบคทีเรียเพียงประเภทเดียว

ถ้ามีคุณค่าทางโภชนาการมีเพียงเซลล์เดียวที่วางอยู่ในสื่อและได้กลุ่มบุคคลจากการสืบพันธุ์ จากนั้นจุลินทรีย์ชุดนี้เรียกว่าโคลน เมื่อร่างโคลนพัฒนาจนมองเห็นได้ด้วยตาเปล่า แบคทีเรียกลุ่มนี้จะเรียกว่าอาณานิคม

โดยปกติการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียที่แยกได้จากแหล่งต่าง ๆ จะดำเนินการแยกจากกัน แต่ละกลุ่มของจุลินทรีย์ที่ปลูกแยกกันนั้นเรียกว่าสายพันธุ์ ดังนั้น หากแยกเชื้อ Staphylococcus ประเภทหนึ่งจากแหล่งที่มาสามแหล่ง (หรือส่วนต่าง ๆ ของผลิตภัณฑ์เดียวกัน คนละคน) พวกเขาพูดถึง Staphylococcus ประเภทนี้สามสายพันธุ์

ปัจจัยการเจริญเติบโตของแบคทีเรีย

เหล่านี้รวมถึงกรดอะมิโนหลายชนิด ลิปิด เบสพิวรีน และสารประกอบอื่นๆ ที่จำเป็นสำหรับการพัฒนาจุลินทรีย์ จุลินทรีย์บางชนิดสามารถผลิตสารที่ต้องการได้อย่างอิสระ ในขณะที่บางชนิดจำเป็นต้องได้รับในรูปแบบสำเร็จรูป ตามความต้องการของจุลินทรีย์ในปัจจัยการเจริญเติบโตบางอย่าง การระบุและการแยกความแตกต่างของแบคทีเรียจะดำเนินการ นอกจากนี้ พารามิเตอร์นี้มีความสำคัญสำหรับการเตรียมสารอาหารที่ถูกต้องสำหรับห้องปฏิบัติการและเทคโนโลยีชีวภาพ:

• กรดอะมิโน. แบคทีเรียอาจต้องการกรดอะมิโนหรือกรดกลุ่มหนึ่งโดยเฉพาะ ดังนั้น คลอสตรีเดียต้องการลิวซีนและไทโรซีน สเตรปโตคอคซีต้องการลิวซีนและอาร์จินีน จุลินทรีย์ที่ต้องการกรดอะมิโนจากภายนอกในการเจริญเติบโตเรียกว่า auxotrophs
• เบสพิวรีนและไพริมิดีน เช่นเดียวกับอนุพันธ์ของเบส (อะดีนีน กัวนีน และอื่นๆ) เป็นปัจจัยสำคัญในการเติบโตของผู้คนมากมายสายพันธุ์สเตรปโทคอคคัส
• วิตามิน. พวกเขาเป็นส่วนหนึ่งของโคเอ็นไซม์ที่แบคทีเรียต้องการ ดังนั้นกรดนิโคตินิกรวมถึงเอไมด์ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของ NAD และ NADP จึงมีความจำเป็นสำหรับโรคคอตีบและชิเกลลาคอรีนีแบคทีเรีย Staphylococcus aureus, pneumococcus, brucella ต้องการวิตามินบีซึ่งเป็นส่วนสำคัญของไพโรฟอสเฟต กรด Pantothenic ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของโคเอ็นไซม์ CoA จำเป็นสำหรับแบคทีเรียบาดทะยักและสเตรปโทคอคคัสบางชนิด ไซโตโครมและกรดโฟลิก ฮีม และไบโอตินที่ก่อตัวจึงมีความจำเป็นต่อ Mycobacterium tuberculosis และ Haemophilus influenzae

ข้อกำหนดด้านสิ่งแวดล้อม

เงื่อนไขการเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย:

1. โภชนาการ. ต้องมีสาร นอกจากนี้ ในรูปแบบที่ย่อยง่าย ซึ่งจำเป็นสำหรับจุลินทรีย์ในการเลี้ยงและเติมพลังงาน ซึ่งรวมถึงสารอินทรีย์และแร่ธาตุ จุลินทรีย์บางชนิดยังต้องการวิตามินและกรดอะมิโนที่ไม่สามารถสังเคราะห์ได้
2. ระดับ pH ที่เหมาะสมที่สุด มันส่งผลต่อการซึมผ่านของเยื่อหุ้มเซลล์และดังนั้นความสามารถในการดูดซับสารอาหารโดยแบคทีเรีย ส่วนใหญ่แล้ว ค่า pH ควรอยู่ที่ระดับ 7, 2–7, 4 จุลินทรีย์จำนวนมากในช่วงชีวิตจะผลิตผลิตภัณฑ์ที่มีปฏิกิริยากรดหรือด่าง และเพื่อไม่ให้ pH ของสารอาหารเปลี่ยนแปลง มันต้องบัฟเฟอร์
3. ไอโซโทนิก. แรงดันออสโมติกในตัวกลางธาตุอาหารเพื่อการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียควรมีค่าเท่ากับภายในเซลล์จุลินทรีย์ มักจะสอดคล้องกับสารละลาย NaCl 0.5%
4. ปลอดเชื้อ. เนื่องจากการปรากฏตัวของแบคทีเรียแปลกปลอมจะบิดเบือนผลการศึกษาของสายพันธุ์ที่วิเคราะห์
5. ระดับความชื้น. ตัวบ่งชี้นี้ควบคู่ไปกับความสม่ำเสมอของสื่อ ควรมีลักษณะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับแบคทีเรียบางประเภท
6. ศักยภาพรีดอกซ์ (RH2). มันแสดงให้เห็นอัตราส่วนของสารที่บริจาคและรับอิเล็กตรอนตลอดจนระดับความอิ่มตัวของออกซิเจนของสารอาหาร สำหรับ aerobes และ anaerobes เงื่อนไขในการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียแตกต่างกันบ้างในตัวบ่งชี้นี้ จุลินทรีย์ไร้อากาศสามารถสืบพันธุ์ได้ดีที่สุดที่ค่า RH2 ต่ำกว่า 5 และจุลินทรีย์แอโรบิกอย่างน้อย 10.
7. ความสม่ำเสมอ. เป็นสิ่งสำคัญที่อาหารเลี้ยงเชื้อประกอบด้วยส่วนผสมแต่ละอย่างในปริมาณคงที่ นอกจากนี้ ควรใช้วิธีแก้ปัญหาที่ชัดเจน ซึ่งช่วยให้ติดตามการเติบโตของพืชผลหรือสังเกตการปนเปื้อนได้ง่ายขึ้น

ประเภทของสื่อวัฒนธรรม

การเลือกอาหารสำหรับจุลินทรีย์ที่กำลังเติบโตนั้นได้รับอิทธิพลจากหลายปัจจัย ได้แก่ ลักษณะของโภชนาการและจุดประสงค์ของการศึกษาวิจัย คุณสมบัติหลักที่อยู่ภายใต้การจำแนกประเภทของสารอาหารคือ:

1. ส่วนประกอบ ตามสารตั้งต้นที่ใช้สร้างซับสเตรต พวกมันแยกแยะ:

• ธรรมชาติซึ่งปรุงจากผลิตภัณฑ์จากสัตว์หรือพืช (เช่น เนื้อสัตว์ นม ผลไม้) และเหมาะสำหรับปลูกแบบผสมพืชผล;
• กึ่งสังเคราะห์ซึ่งผลิตภัณฑ์อาหารจากธรรมชาติราคาแพงจะถูกแทนที่ด้วยผลิตภัณฑ์ที่ไม่ใช่อาหาร (เช่น กระดูกป่น ลิ่มเลือด) และเหมาะสมที่สุดสำหรับการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียบางชนิดหรือแยกผลิตภัณฑ์เมตาบอลิซึมออกจาก สิ่งแวดล้อม;
• สังเคราะห์ ซึ่งเตรียมจากสารประกอบเคมีในปริมาณที่แม่นยำ มีองค์ประกอบคงที่ที่รู้จักและสามารถทำซ้ำได้ง่าย

2. ความสม่ำเสมอ (ความหนาแน่น) แยกแยะสภาพแวดล้อม:

• ของเหลว;
• หนาแน่น;
• กึ่งของเหลว

สองอันสุดท้ายเตรียมจากสารละลายพิเศษหรือสารเหลวด้วยการเติมวุ้นหรือเจลาตินเพื่อสร้างความหนาแน่นที่ต้องการ นอกจากนี้ สภาพแวดล้อมที่หนาแน่นสำหรับการเจริญเติบโตของแบคทีเรียคือ ซีรั่มเลือด มันฝรั่ง สื่อซิลิกาเจล คาราจีแนน

3. สารประกอบ. บนพื้นฐานนี้ สภาพแวดล้อมคือ:

• เรียบง่าย รายการสั้น ๆ คือ Meat Peptone Broth (MBB), Hottinger Broth and Agar, Meat Peptone Agar (MPA), เจลาตินสารอาหาร และน้ำเปปโตน
• ซับซ้อน เตรียมจากแบบง่ายๆ ที่เติมเลือด เวย์ คาร์โบไฮเดรต และสารอื่นๆ

4. การนัดหมาย. สื่อสารอาหารต่อไปนี้มีความโดดเด่น:

• main ใช้สำหรับปลูกจุลินทรีย์ก่อโรคจำนวนมาก (มักจะเป็นองค์ประกอบที่เรียบง่าย);
• ชนิดพิเศษใช้สำหรับแยกและเพาะเลี้ยงแบคทีเรียที่ไม่เติบโตบนพื้นผิวธรรมดา
• selective (เลือกได้ด้วย) เหมาะสำหรับการแยกแบคทีเรียบางชนิดและยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่เกี่ยวข้อง (selectivityที่สร้างขึ้นโดยการเพิ่มสารบางชนิดลงในสื่อเช่นยาปฏิชีวนะหรือเกลือหรือโดยการปรับ pH);
• การวินิจฉัยแยกโรคทำให้สามารถแยกแยะแบคทีเรียประเภทหนึ่งจากอีกประเภทหนึ่งได้โดยการประเมินกิจกรรมของเอนไซม์ เช่น ของตัวกลาง
• สารกันบูดเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการฉีดวัคซีนเบื้องต้นด้วยการขนส่งตัวอย่างในภายหลัง เนื่องจากจะช่วยป้องกันการตายของจุลินทรีย์ ตลอดจนยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียอื่นๆ

เตรียมสื่อ

ขั้นตอนที่สำคัญที่สุดในการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียแบบไม่ใช้ออกซิเจนคือการเตรียมสารอาหารที่เหมาะสม หลังจากเลือกพารามิเตอร์ที่เหมาะสมแล้ว ให้ดำเนินการตามขั้นตอนต่อไปนี้:

• การชั่งน้ำหนัก โดยการเลือกตัวอย่างส่วนประกอบบนเครื่องชั่งเชิงวิเคราะห์
• ละลายในน้ำกลั่นที่ร้อนถึง 70 ° C และฟอสเฟต เกลือขนาดเล็ก และเกลือขนาดใหญ่จะถูกละลายแยกกัน
• ต้มในอ่างน้ำสองนาที
• pH กำหนดโดยกระดาษแสดงสถานะหรือโพเทนชิออมิเตอร์
• กรองผ่านผ้าเปียกหรือกระดาษกรองสำหรับของเหลวเช่นเดียวกับสื่อที่หลอมเหลวและผ่านตัวกรองผ้าฝ้ายสำหรับวุ้น
• บรรจุขวดที่ความจุ 3/4;
• การทำหมันแบบใช้สื่อกลาง;
• การควบคุมความเป็นหมันทำได้โดยการแช่ตัวในเทอร์โมสตัทเป็นเวลาสองวัน ตามด้วยการดู
• การควบคุมสารเคมีเพื่อสร้าง pH และเนื้อหาที่จำเป็นรายการ;
• การควบคุมทางชีวภาพโดยการฉีดวัคซีนทดลอง

ฆ่าเชื้อเครื่องแก้วและสื่อ

หลักการพื้นฐานของการเพาะปลูกแบคทีเรียอย่างหนึ่งคือการเป็นหมัน การเจริญเติบโตและการพัฒนาของจุลินทรีย์จากต่างประเทศสามารถส่งผลต่อลักษณะของสารอาหารโดยการเปลี่ยนองค์ประกอบทางเคมีและ pH การทำหมันเป็นเงื่อนไขหลักสำหรับการปลูกวัฒนธรรมบริสุทธิ์ ในทางปฏิบัติ คำนี้หมายถึงวิธีการทำลายรูปแบบชีวิตทั้งหมดบนพื้นผิวและในปริมาตรของวัตถุที่ผ่านการฆ่าเชื้ออย่างแน่นอน เรือ เครื่องมือที่ใช้ สื่อ และสิ่งของอื่น ๆ ที่ใช้ในระหว่างการศึกษาได้รับการฆ่าเชื้อ

การทำหมันบางประเภท:

• จุดระเบิด. การทำหมันของลูปและเข็มสำหรับการเพาะ สไลด์แก้ว เครื่องมือบางอย่างสามารถทำได้โดยใช้เตาหรือตะเกียงวิญญาณ
• เดือด. เหมาะสำหรับจับเข็มฉีดยา เข็มฉีดยา อาหาร แต่ไม่ฆ่าเชื้อสปอร์ของแบคทีเรีย
• ฆ่าเชื้อด้วยความร้อนแห้ง. ดำเนินการในตู้อบแห้งแบบพิเศษและเหมาะสำหรับการแปรรูปขวดแก้ว หลอดทดลอง และเครื่องแก้วในห้องปฏิบัติการอื่นๆ
• นึ่งฆ่าเชื้อ. วิธีนี้เป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพสูงในหม้อนึ่งความดัน แต่ไม่เหมาะสำหรับสารอาหารที่มีโปรตีนหรือสารประกอบอื่นๆ ที่สลายตัวที่อุณหภูมิสูง การประหยัดมากขึ้นสามารถเรียกได้ว่าเป็น tyndalization ดำเนินการใน Koch Boiler และรวมการงอกของสปอร์กับการทำลายของพวกมัน
• พาสเจอร์ไรส์. ใช้สำหรับสื่อที่เปลี่ยนคุณสมบัติเมื่อต้ม (เช่น นม ไวน์ เบียร์) สามารถกำจัดจุลินทรีย์ที่ไม่มีสปอร์ อุณหภูมิในการประมวลผลเพียง 50-60 ° C เป็นเวลาสิบห้าถึงสามสิบนาที ในบางกรณี จะใช้การฆ่าเชื้อด้วยความเย็น โดยใช้ฟิลเตอร์หรือรังสียูวี

เงื่อนไขการเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย

การเจริญเติบโตและการพัฒนาของแบคทีเรียเป็นไปได้ภายใต้ปัจจัยบางอย่างและค่าของแต่ละคนเท่านั้น:

1. อุณหภูมิ. มีแบคทีเรียสามกลุ่มที่แตกต่างกันตามความชอบด้านอุณหภูมิ:

• thermophiles หรือจุลินทรีย์ที่ชอบความร้อน เติบโตที่อุณหภูมิ 45-90°C ซึ่งหมายความว่าจะไม่เพิ่มจำนวนในสิ่งมีชีวิตของมนุษย์และสัตว์
• โรคจิตหรือจุลินทรีย์ที่ชอบความหนาวเย็น ชอบอุณหภูมิในช่วง 5-15 ° C และปลูกในห้องเย็น
• mesophiles พัฒนาที่อุณหภูมิ 25-37 ° C รวมถึงแบคทีเรียจำนวนมาก

2. แสงสว่าง. เป็นคุณลักษณะของการเพาะปลูกแบคทีเรียที่มีแสงจ้าเนื่องจากเป็นกระบวนการสังเคราะห์แสง แต่สำหรับจุลินทรีย์ส่วนใหญ่ การให้แสงไม่ใช่ข้อกำหนดเบื้องต้น และในทางกลับกัน รังสีอัลตราไวโอเลตจากแสงอาทิตย์สามารถยับยั้งการพัฒนาของพวกมันได้

3. น้ำ. จุลินทรีย์ทั้งหมดต้องการน้ำในรูปแบบ (ของเหลว) ที่เข้าถึงได้ นั่นคือเหตุผลที่อาหารแช่แข็งมีการเจริญเติบโตของแบคทีเรียเพียงเล็กน้อยหรือไม่มีเลย

4. ความเป็นกรดของสิ่งแวดล้อม หลักการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียนี้ได้รับการกล่าวถึงในรายละเอียดข้างต้นแล้ว

5. การเติมอากาศ ออกซิเจนเป็นองค์ประกอบทางเคมีเป็นส่วนหนึ่งของน้ำและเป็นสารประกอบจำนวนมากที่ใช้สำหรับการเพาะปลูกจุลินทรีย์ ก๊าซออกซิเจนสามารถบรรจุในน้ำและของเหลวอื่นๆ ในรูปแบบที่ละลายได้ แบคทีเรียส่วนสำคัญต้องการโมเลกุลออกซิเจนอย่างสม่ำเสมอ แต่สำหรับจุลินทรีย์จำนวนหนึ่ง ไม่จำเป็นหรือที่แย่กว่านั้นคือ ก๊าซออกซิเจนเป็นพิษต่อพวกมัน เนื่องจากพวกมันไม่มี catalase และ peroxidase ที่ทำลายผลิตภัณฑ์ระบบทางเดินหายใจที่เป็นพิษ ดังนั้น ขั้นตอนที่สำคัญที่สุดในการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียแบบไม่ใช้ออกซิเจนคือการกำจัดโมเลกุล O₂ ออกจากสารอาหาร

6. การเพาะปลูกจุลินทรีย์ การเพาะเลี้ยงแบคทีเรียแอโรบิกและแอนแอโรบิกจะดำเนินการในชั้นต่างๆ ของสิ่งแวดล้อมและในโหมดต่างๆ

การเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์แอโรบิก

การเพาะเลี้ยงแบคทีเรียแอโรบิกต้องใช้อ็อกซิเจนระดับโมเลกุล เพื่อให้ได้มาซึ่งวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของแอโรบิกที่สามารถนำมาใช้ในทางการแพทย์และอุตสาหกรรมอาหารได้สำเร็จ ใช้วิธีการดังต่อไปนี้:

• พื้นผิวเติบโตบนตัวกลางหนาแน่นหรือในสื่อของเหลว (ชั้นบาง ๆ ของพวกมัน) เมื่อออกซิเจนมาจากอากาศโดยตรง
• การเพาะเลี้ยงอย่างล้ำลึกในสื่อของเหลว เมื่อปริมาณออกซิเจนที่ละลายในพวกมันเพิ่มขึ้นทำได้โดยการเติมอากาศคงที่

การเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ไร้อากาศ

หลักการพื้นฐานของการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียประเภทนี้คือการสัมผัสกับออกซิเจนในบรรยากาศน้อยที่สุด การให้เงื่อนไขสำหรับการเจริญเติบโตนั้นยากกว่าแอโรบิก วิธีการต่อไปนี้ใช้เพื่อแยกสิ่งมีชีวิตที่ไม่ใช้ออกซิเจนออกจากโมเลกุล O₂:

1. กายภาพ. วิธีการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียแบบไม่ใช้ออกซิเจนนี้จะลดลงจนถึงการเพาะเลี้ยงในอุปกรณ์สูญญากาศพิเศษ - microanaerostat อากาศในนั้นถูกแทนที่ด้วยก๊าซผสมพิเศษของไนโตรเจนโดยเติมไฮโดรเจน 10% และคาร์บอนไดออกไซด์ 5%
2. เคมี. ซึ่งรวมถึง: การใช้สารดูดซับ (เช่น Fe, Na₂S₂O4_{, CuCl) หรือสารรีดิวซ์ (เช่น กรดแอสคอร์บิก)}
3. ชีวภาพ. มันขึ้นอยู่กับการปลูกฝังร่วมกันของแอโรบิกและแอนแอโรบในระบบปิด วิธีการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียนี้เกี่ยวข้องกับการเพาะเลี้ยงครึ่งหนึ่งของจานเพาะเชื้อกับแบคทีเรียแอโรบิกบางชนิด และอีกครึ่งหนึ่งใช้แบคทีเรียแบบไม่ใช้ออกซิเจนที่ศึกษา การพัฒนาจะเริ่มขึ้นเมื่อออกซิเจนหมด

วิธีการเพาะต่อไปนี้เหมาะสำหรับการเพาะเลี้ยงแบคทีเรียแบบไม่ใช้ออกซิเจน:

• ในชั้นผิว;
• ในชั้นผิวที่เติมพาราฟินปลอดเชื้อ
• ในอาหารหนาทึบ;
• ในชั้นลึกของเนื้อเหนียว

รับวัฒนธรรมบริสุทธิ์

นักจุลชีววิทยามักจะทำงานกับตัวอย่างที่มีจุลินทรีย์หลายชนิดอาศัยอยู่ อย่างไรก็ตาม เพื่อกำหนดตำแหน่งที่เป็นระบบของจุลินทรีย์ (ตระกูล สกุล สปีชีส์) เช่นเดียวกับการศึกษาลักษณะของจุลินทรีย์ จำเป็นต้องแยกพวกมันออกและสร้างวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ มีความสำคัญอย่างยิ่งในอุตสาหกรรมอาหารหลายประเภท เช่น ชีส ขนมปัง kvass ไวน์ ฯลฯ การเพาะเลี้ยงแบคทีเรียกรดแลคติกทำให้สามารถได้รับส่วนประกอบสำคัญสำหรับการผลิตผลิตภัณฑ์นมหมัก แป้ง โกโก้ หญ้าหมัก และแม้แต่พลาสติก

วิธีการแยกเพาะเลี้ยงเชื้อบริสุทธิ์ในตัวกลางที่มีความหนาแน่นสูงนั้นขึ้นอยู่กับการแยกเซลล์จุลินทรีย์ด้วยวิธีทางกลด้วยการเพาะเลี้ยงที่แยกออกมาในภายหลัง ตัวอย่างจะถูกถ่ายโอนไปยังปริมาตรของน้ำหรือน้ำเกลือที่ปราศจากเชื้อ (ปริมาตร 10-100 มล.) แล้วเขย่าเป็นเวลาสองนาที ในการสกัดจุลินทรีย์ที่อยู่ในความหนาของวัสดุที่ทำการศึกษา (เช่น ไส้กรอกหรือชีส) ขั้นแรกให้ทำการถูชิ้นงานตัวอย่างด้วยเครื่องมือฆ่าเชื้อด้วยทราย วัสดุที่ผ่านการเตรียมการเบื้องต้นซึ่งมีน้ำหนัก 1 กรัมหรือปริมาตร 1 มล. จะถูกเจือจางด้วยน้ำปราศจากเชื้อ 10, 100, 1000 เป็นต้น เลือกระดับการเจือจางเพื่อให้ความเข้มข้นของเซลล์ที่สอดคล้องกับความสามารถของวิธีการ

การเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ที่ตามมาคือการเตรียมสารอาหาร มักจะเลือกสื่อหนาแน่น (MPA) ครั้งแรกจะละลายและทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิ 45-50 °C จากนั้นจึงเทลงในจานเพาะเชื้อหลายจาน (สามถึงห้าชิ้น) ที่ด้านล่างของแผ่นไม้กวาดจากสารทดสอบที่มีความเข้มข้นต่างๆ ต่อไปจะทำการผสมสารอาหารที่ยังไม่แช่แข็งและวัสดุที่นำเข้ามา นี่คือวิธีการตรึงเซลล์ที่จุดต่างๆ ในปริมาตรของซับสเตรต

ถัดไป จานเพาะเชื้อจะถูกวางในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 2 วันที่ 22 °C ในช่วงเวลานี้ เซลล์จะเพิ่มจำนวนขึ้นจนมองเห็นได้ด้วยตาเปล่าว่าอาณานิคมที่เกิดจากแต่ละเซลล์ แต่ละคนเป็นวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของชนิดของแบคทีเรียจากเซลล์ของมันกุหลาบ

หลังจากนั้น จากจานเพาะเชื้อ จุลินทรีย์จะถูกเพาะเลี้ยงย่อยในหลอดทดลองที่แยกจากกันซึ่งเต็มไปด้วยสารอาหาร ด้วยวิธีนี้ วัฒนธรรมที่บริสุทธิ์จะถูกแยกออกจากตัวอย่างแบบผสม วิธีนี้ใช้ชื่อผู้พัฒนา - R. Koch เรียกอีกอย่างว่าวิธีถ้วยหรือการหว่านเมล็ดพืชหมดสิ้น หลังจากได้รับเชื้อแบคทีเรียชนิดต่างๆ ที่บริสุทธิ์แล้ว รูปร่าง สปอร์ และครอบครัวจะถูกกำหนด

งานทั้งหมดต้องดำเนินการตามหลัก asepsis เพื่อหลีกเลี่ยงการพัฒนาก่อนวัยอันควรของจุลินทรีย์ ควรดำเนินการศึกษาทันทีหลังจากการสุ่มตัวอย่าง น้ำประปาจะได้รับการวิเคราะห์หลังจากการระบายส่วนแรก เนื่องจากอาจมีจุลินทรีย์ที่สะสมอยู่ในท่อและก๊อก จุลินทรีย์ของผลไม้ เบอร์รี่ และผักส่วนใหญ่ตั้งอยู่บนพื้นผิว (เปลือก) ดังนั้นจึงทำการล้างจากมัน ในการทำเช่นนี้ให้วางทารกในครรภ์ในภาชนะที่ปลอดเชื้อแล้วเติมน้ำตามปริมาณที่ต้องการ จากนั้นเขย่าอย่างแรงและเทน้ำลงในภาชนะอื่น พืชผลจากผลิตภัณฑ์ผ้าจะได้มาในรูปแบบ swabs แต่ก่อนอื่น ตัดเป็นชิ้นตามขนาดที่กำหนด