การติดเชื้อแบคทีเรียที่หลากหลายจำเป็นต้องมีการระบุเชื้อโรคและคำจำกัดความของสายพันธุ์อย่างชัดเจน ในการกำหนดประเภทของจุลินทรีย์ นักจุลชีววิทยาจะได้รับความช่วยเหลือจากคุณสมบัติของทิงเจอร์ - ความอ่อนแอของจุลินทรีย์ต่อการย้อมสีด้วยสีย้อมต่างๆ วิธีนี้ช่วยให้คุณสำรวจลักษณะทางสัณฐานวิทยาของเชื้อโรคได้ คุณสมบัติของทิงเจอร์ของแบคทีเรียมีความสำคัญอย่างยิ่งสำหรับการวิจัยเชิงปฏิบัติและเชิงทฤษฎีในด้านจุลชีววิทยา
วิจัยจุลินทรีย์
ในทางแบคทีเรียวิทยา การย้อมสีจุลินทรีย์มีหลายวิธี ทั้งหมดขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของทิงเจอร์ของแบคทีเรีย การย้อมสีช่วยให้คุณสามารถกำหนดรูปร่าง โครงสร้าง ขนาด ตำแหน่งสัมพัทธ์ได้ วิธีนี้ช่วยแก้ปัญหาการจัดระบบประเภทของจุลินทรีย์ในชีววิทยาทั่วไปและจุลชีววิทยาเปรียบเทียบ
ทาสีทำไม
แบคทีเรียมีอยู่จริงสิ่งมีชีวิตที่โปร่งใสและปราศจากการใช้การย้อมสีพวกเขาจะมองเห็นได้ไม่ดีสำหรับกล้องจุลทรรศน์ทั่วไป คุณสามารถใช้กล้องจุลทรรศน์ชนิดพิเศษ (เฟสคอนทราสต์ สนามมืด) เพื่อศึกษาวัตถุได้ แต่วิธีที่ง่ายที่สุดคือการทำให้เปื้อน หลังจากนั้นจะมองเห็นแบคทีเรียในกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงทั่วไป
ตัวอย่างการเตรียม
ไม่ว่าจะใช้เทคนิคการย้อมสีอย่างไร มีกฎเกณฑ์ที่เหมือนกันในการเตรียมวัตถุที่กำลังศึกษา ขั้นตอนต่อไปนี้เป็นข้อบังคับ:
- เครื่องหมันทำป้ายบนกระจกสไลด์
- ตัวอย่างกำลังถูกทำให้แห้ง ทำได้ที่อุณหภูมิห้องหรือใช้ตู้อบผ้า
- ตามด้วยขั้นตอนการตรึง - จุลินทรีย์จะเกาะติดกับแก้วด้วยสารประกอบพิเศษ
- การย้อมสีที่เหมาะสม - ตัวอย่างถูกย้อมด้วยสีย้อมตามระยะเวลาที่กำหนด หลังจากนั้นจึงล้างออก
- การเป่าแห้งขั้นสุดท้าย - ตัวอย่างถูกทำให้แห้งอีกครั้ง
สีย้อมที่พบมากที่สุด
สีย้อมที่นิยมใช้กันมากที่สุดนั้นอิงจาก aniline ที่มีค่าความเป็นกรดต่างกัน (pH) สีย้อมส่วนใหญ่เป็นผงที่เจือจางในแอลกอฮอล์
สีย้อมซึ่งไอออนบวกเป็นสารแต่งสีเรียกว่าเบสิก (pH มากกว่า 7) สามารถใช้ย้อมจุลินทรีย์ในสีแดง (ม่วงแดง ซาฟรานิน) ไวโอเล็ต (เมทิล ไวโอเล็ต ไธโอนีน) น้ำเงิน (เมทิลีนบลู) เขียว (เขียวมาลาไคต์) น้ำตาล (ไครโซอิดิน) และสีดำ (อินดูลิน)
สีย้อม ซึ่งสารให้สีเป็นแอนไอออน เรียกว่า กรด (pH น้อยกว่า 7) พวกเขาจะเปื้อนตัวอย่างสีแดง (eosin), สีเหลือง (picrin) หรือสีดำ (nigrosin)
มีกลุ่มของสีย้อมที่เป็นกลาง (เช่น โรดามีน B) ซึ่งทั้งไพเพอร์และแอนไอออนทำหน้าที่เป็นสารแต่งสี
วัฒนธรรมตายหรือมีชีวิตอยู่
วิธีการย้อมสีแบ่งออกเป็นสองกลุ่มตามรูปแบบชีวิตของตัวอย่างทดสอบ
- การย้อมสีที่สำคัญ (ตลอดชีพ) วิธีการศึกษาคุณสมบัติของจุลินทรีย์นี้ใช้ในการศึกษาเนื้อเยื่อที่มีชีวิต ซึ่งทำให้สามารถสังเกตกระบวนการสำคัญของจุลินทรีย์ได้ สำหรับการย้อมสีนี้ จะใช้สีย้อมที่มีความเป็นพิษต่ำและมีพลังการแทรกซึมสูง
- การย้อมสีหลังการมีชีวิต นี่คือการย้อมสีของจุลินทรีย์ที่ตายแล้วหรือถูกฆ่า ด้วยคุณสมบัติทิงเจอร์ของแบคทีเรีย นักจุลชีววิทยาจึงกำหนดโครงสร้างของพวกมัน เป็นการย้อมสีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายมากที่สุด
แกรมบวกและแกรมลบ
มันเป็นลักษณะเฉพาะของแบคทีเรียที่สามารถพบได้ในคำแนะนำสำหรับยาต่างๆ วิธีการศึกษาคุณสมบัติของทิงเจอร์ของแบคทีเรียนี้ขึ้นอยู่กับการใช้สีย้อม Gentian Violet และการตรึงไอโอดีน นี่เป็นเทคนิคของ Hans Christian Gram แพทย์ชาวเดนมาร์กที่เสนอสิ่งนี้ในปี 1884 จากการย้อมสีนี้ แบคทีเรียจะถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่ม:
- กรัม (+) - เปลี่ยนเป็นสีน้ำเงิน(เชื้อ Staphylococci และ Streptococci).
- กรัม (-) - ย้อมสีชมพูเป็นสีแดง (แบคทีเรีย, ซัลโมเนลลา, อีโคไล).
ผลการย้อมสีที่แตกต่างกันนั้นเกิดจากคุณสมบัติของทิงเจอร์ที่แตกต่างกันของผนังแบคทีเรีย วิธีแกรมสเตนยังคงเป็นวิธีหลักในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อบางชนิด
เทคนิคการย้อมสีอื่นๆ
มาอธิบายลักษณะอีกสองสามวิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในด้านแบคทีเรียวิทยากัน
- วิธี Ziehl-Nelson - กำหนดความต้านทานกรดของแบคทีเรีย ระบุสาเหตุของวัณโรคและมัยโคแบคทีเรีย
- เทคนิค Romanovsky-Giemsa - คราบแบคทีเรียที่เป็นกรด (กรดอะซิติกและกรดแลคติก) เป็นสีแดง และแบคทีเรียชนิด Basophilic (สไปโรเชตและโปรโตซัว) เป็นสีน้ำเงิน
- เทคนิคของ Morozov - คราบแบคทีเรียสีน้ำตาลและทำให้แฟลเจลลามองเห็นได้
ดูสปอร์ได้
การย้อมสีฟูชชินของซีเอลช่วยให้คุณเห็นสปอร์ของแบคทีเรียได้ หลังการย้อมสีมีสีชมพู มองเห็นได้ชัดเจนบนพื้นหลังของแบคทีเรียสีน้ำเงิน วิธีนี้ยังเป็นเครื่องมือของแบคทีเรียวิทยาและมีความสำคัญในทางปฏิบัติอย่างมาก