การประยุกต์ใช้ปฏิกิริยา Voges-Proskauer สำหรับการแยกความแตกต่างทางจุลชีววิทยาของ enterobacteria

สารบัญ:

2024 ผู้เขียน: Angel Austin | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2023-12-17 05:43

ในการกำหนดความแตกต่างของ enterobacteria และ vibrios บางชนิด ปฏิกิริยา Voges-Proskauer ตรงบริเวณพิเศษ การทดสอบนี้ใช้ความสามารถของแบคทีเรียในการหมักกลูโคสเพื่อสร้างอะซิโตอิน

สาระสำคัญของกระบวนการวิจัย

ในจุลชีววิทยา ปฏิกิริยา Voges-Proskauer มักใช้เพื่อแยกความแตกต่างภายในครอบครัว Yersinia ของ enterobacteria (รวมถึงเชื้อโรคของ pseudotuberculosis และ enterocolitis), Escherichia coli และ aerobes ที่สร้างสปอร์ ผลลัพธ์เป็นภาพโดยระบายสีสื่อเมื่อมีการเพิ่มรีเอเจนต์บางอย่าง

การทดสอบนี้เป็นของซีรีส์ IMViC (ตัวย่อของ Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate) - กลุ่มการทดสอบการระบุตัวตนรวมถึงคำจำกัดความเชิงอนุพันธ์:

กับอินโดล โดยพิจารณาจากการแตกตัวของทริปโตเฟนเป็นอินโดล ใช้ต่อหน้าสารรีเอเจนต์ Kovacs หรือ Ehrlich
ใช้methylroth หรือ methyl red ซึ่งตรวจจับ pH ที่กำหนดอันเป็นผลมาจากการเผาผลาญกลูโคส
Voges-Proskauer ปฏิกิริยาสำหรับการตรวจจับ acetyl-methylcarbinol;
การใช้ซิเตรตด้วยการเปลี่ยนสีอันเป็นผลมาจากการทำให้ตัวกลางเป็นด่าง

สาระสำคัญของกระบวนการคือการแสดงภาพการปรากฏตัวของแบคทีเรียที่ได้รับการวินิจฉัยเนื่องจากการทำงานร่วมกันของอะซิโตอินที่เกิดขึ้นจากพวกมันกับโปแตชที่กัดกร่อนในที่ที่มีออกซิเจน Acetyl-methylcarbinol ถูกออกซิไดซ์เป็น diacetyl ซึ่งเป็นสารประกอบสีแดงหรือสีชมพูสด เพิ่มความไวของการทดสอบโดยการแนะนำ alpha-naphthol ก่อนเติม caustic potash

การตั้งค่าการทดสอบ

สูตรของปฏิกิริยา Voges-Proskauer เกี่ยวข้องกับการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ในเบื้องต้น วัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ถูกหว่านลงบนสื่อในการวินิจฉัยแยกโรคของคลาร์ก รูปแบบหนึ่งคือน้ำซุปของคลาร์ก (โดยไม่เติมวุ้น-วุ้น) ใช้สื่อสำเร็จรูปหรือเตรียมอย่างอิสระ ส่วนผสม:

เปปโทน 5g;
กลูโคส 5g;
5g dibasic โพแทสเซียม ฟอสเฟต;
กลั่น 1L

ในระหว่างการศึกษา เพาะเลี้ยงเชื้อด้วยการวนรอบแบคทีเรียที่ปลอดเชื้อลงในอาหารที่เป็นของเหลว ปริมาณ - 5 มล. ในหลอดทดลองพร้อมตัวควบคุม การฟักไข่จะดำเนินการที่อุณหภูมิ 35-37 องศาเป็นเวลาสองวัน ถัดไป การศึกษาปฏิกิริยา Voges-Proskauer จะดำเนินการในขั้นตอน:

2 เพาะเชื้อน้ำซุป 5 มล. ลงในหลอดปลอดเชื้อ
เติมอัลฟ่า-แนฟทอลหกหยด (สารละลายแอลกอฮอล์ 5%)
เพิ่ม 40%สารละลายโพแทสเซียมกัดกร่อนในปริมาณ 0.1 มล. หรือสองหยด
กวนเบา ๆ เขย่าหลอดทดลอง
ประเมินผลหลังจากเริ่มการทดลอง 15 นาที

วิธีทดสอบทางเลือกคือการฟักไข่ข้ามคืน ซึ่งเวลาจะลดลงเหลือ 18 ชั่วโมงหรือไม่เกินหนึ่งวัน นอกจากวิธีการนี้แล้ว ยังใช้การทดสอบแบบเร่งด่วนอีกด้วย: เพาะเลี้ยงในสื่อ 2 มล. วนซ้ำ บ่มประมาณสี่ชั่วโมง จากนั้นรีเอเจนต์จะถูกเติมในปริมาณที่เท่ากัน 2-3 หยด ผสมและ ผลลัพธ์จะถูกประเมินหลังจากสิบนาที

การควบคุมเป็นหนึ่งในสาเหตุของโรคปอดบวม Klebsiella pneumoniae - สายพันธุ์ atcc 13883

Klebsiella pneumoniae สายพันธุ์สำหรับการควบคุม

ประเมินผล

หลังจากเวลาที่กำหนดหลังจากเติมรีเอเจนต์ (ตั้งแต่ 5 ถึง 15 นาที) ควรสังเกตสีเชอร์รี่แดงด้วยปฏิกิริยาเชิงบวกที่เด่นชัด สีแดงและสีชมพู - ด้วยปฏิกิริยาเชิงบวกที่อ่อนแอ ไม่มีการบันทึกการเปลี่ยนแปลงเป็นผลลบ

โปแตชโซดาไฟที่มากเกินไปในสารละลายสามารถทำให้เกิดปฏิกิริยาทางบวกเลียนแบบ โดยย้อมเป็นสีทองแดง ในกรณีนี้ ควรบันทึกการตอบสนองเชิงลบของอาณานิคมที่ทดสอบไว้ นอกจากนี้ การย้อมสีทองแดงจะปรากฏขึ้นในกรณีที่ได้รับการประเมินเป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงหลังจากการแนะนำรีเอเจนต์

เมื่อประเมินผล จะต้องคำนึงว่าการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ที่ศึกษาเป็นเวลานาน (มากกว่าสามวัน) ทำให้เกิดกรดของตัวกลาง ซึ่งอาจนำไปสู่ผลการศึกษาที่ไม่ถูกต้อง ปฏิกิริยาอาจเป็นบวกเล็กน้อยหรือลบเท็จ